鹅肥肝脂肪酸检测的试验过程

　　上文我们给出了鹅肥肝脂肪酸检测方法的材料有仪器，本文就带大家详细了解下它的试验过程：

　　1、样品前处理：

　　将鹅肝匀浆，称取0.1g鹅肝(准确到0.0001g)，加入9mL氯仿-甲醇溶液(V氯仿V甲醇=21)中，再加入2mL盐水，匀浆。离心(4000r/min，30min)取氯仿层，旋转蒸发，除去氯仿。

　　2、皂化条件：

　　上述操作旋转蒸发后的样品，加入2mol/LKOH-乙醇溶液，采用冷凝会流装置水浴加热回流。

　　3、皂化后处理：

　　上述操作皂化后的鹅肥肝样品再次旋转蒸发，除去乙醇，用20mL蒸馏水分3次洗蒸发瓶，转移到分液漏斗中，加入石油醚10mL，提取不皂化物2次。在水层中加入稀盐酸调整pH值至2.0，使脂肪酸从肥皂中游离。再加入15mL石油醚，离心(4000r/min，30min)取石油醚层。用无水Na2SO4干燥、保存。

　　4、甲酯化方法：

　　（1）硫酸甲酯化：取上述皂化物旋转蒸发除去石油醚，放入100mL烧瓶中，加入20mL4%硫酸-甲醇溶液，水浴加热，反应冷却后加入10mL正己烷和5mL水，混匀，离心，水洗至中性。将正己烷层取出，Na2SO4干燥，氮气浓缩，定容待测。

　　（2）盐酸甲酯化：取皂化物旋转蒸发除去石油醚，放入100mL烧瓶中，加入20mL4%盐酸-甲醇溶液，水浴加热，其后操作同（1）节。

　　（3）BF3 甲酯化：取皂化物旋转蒸发除去石油醚，放入100mL茄型烧瓶中，加入20mL14%BF3-甲醇溶液，水浴加热，其后操作同（1）节。

　　（4）KOH 甲酯化：取皂化物旋转蒸发除去石油瞇，放入100mL茄型烧瓶中，加入20mL14%BF3-甲醇溶液，水浴加热，其后操作同（1）节。

　　（5）甲醇钠甲酯化：取皂化物旋转蒸发除去石油醚，放入100mL茄型烧瓶中，加入20mL14%BF-甲醇溶液，水浴加热，其后操作同（1）节。

　　5、鹅肥肝CC分析条件：HP-FFAP毛细管柱，29.mmx320um(内径)x0.25pm(膜厚);色谱柱程序升温:160℃保留1min，以5℃/min升至220℃，保留8min;载气为氮气，总流速70ml/min。